膜-胶10秒快速染色液 (染胶染膜) P1601
货号 |
产品名称 |
规格 |
价格 |
P1601-100 |
膜-胶10秒快速染色液 (染胶染膜) |
100ml |
160元 |
P1601-250 |
膜-胶10秒快速染色液 (染胶染膜) |
250ml |
320元 |
描述:膜-胶10秒快速染色液是Dual-Dye染料的水溶液,不含有毒化学品,可对PVDF和NC膜以及聚丙烯酰胺凝胶蛋白进行快速染色。灵敏度极高,可检测10 ng蛋白条带,而丽春红膜染色灵敏度为1000 ng,苏丹黑为500 ng。本产品不使用醋酸和甲醇等有毒物质,染色剂可直接溶于水。膜染色1-2分钟即可完毕,条带清晰为紫褐色,背景染色极低。新鲜或陈旧的干燥膜均可染色。染色条带清晰不退色,可直接扫描或照相。染色完全可逆,染过的膜在含0.05% Tween 20的封闭液封闭即可脱色,也可在碱性条件下数秒内完全脱色。不影响后续Western Blot。适用于硝酸纤维素膜、PVDF膜、尼龙膜。用于监测蛋白转膜,膜染色蛋白条带可用做Western Blot内对照。可以反复使用2-4次。
MemGel Stain染液可直接用于硝酸纤维素膜和PVDF膜快速染色。1:1稀释后可用于聚丙烯酰胺凝胶蛋白快速染色。SDS-聚丙烯酰胺凝胶在蒸馏水或甲醇-醋酸溶液中洗涤30分钟,浸入适量的醋酸-甲醇溶液和等量的膜-胶10秒快速染色液染色2-10分钟即可显示蛋白条带。只需在甲醇-醋酸溶液脱色10分钟即可得到背景干净的蛋白条带。50分钟完成染色,灵敏度为50 ng/条带,高于考马斯亮兰方法。凝胶染色液可反复使用2-4次。
规格:100ml 250ml
储存: 室温保存 12个月有效
操作步骤:
PVDF/NC膜染色:
1. 将PVDF膜或NC膜完全浸入染色工作液,室温1-2分钟,膜上出现紫褐色蛋白条带。若蛋白丰富则10秒钟即可达到最佳对比度。没有蛋白条带表明膜上没有蛋白。
2. 取出膜,扫描或照相。如果染色背景较深,可用蒸馏水清洗背景染色,直到出现满意的对比度。在水中停留更长时间会缓慢洗去部分染色,但条带仍清晰可见。脱色过度可以重新染色。染过色的膜可干燥保存。
3. 将染色膜直接放入含去垢剂的封闭缓冲液中封闭(150 mM NaCl, 20 mM Tris-Cl pH7.4, 5% defat milk, 0.05% Tween 20)。1小时后膜染色将完全褪去,不影响后续Western Blot操作。另外,将膜浸入0.05-0.1N NaOH水溶液中,数十秒内即可完全清除膜染色,不影响后续Western Blot操作。
聚丙烯酰胺凝胶蛋白染色溶液配制:
配制50%甲醇(或乙醇)-2%醋酸溶液:
甲醇(或乙醇) 50 ml (自备)
冰醋酸 2 ml (自备)
蒸馏水 48 ml
室温保存。
配制1X凝胶染色工作液:
MemGel Stain Solution 50 ml
甲醇(或乙醇) 50 ml
冰醋酸 2 ml
室温保存。
聚丙烯酰胺凝胶蛋白染色程序:
1. SDS-聚丙烯酰胺凝胶在蒸馏水或50%甲醇(或乙醇)-2%醋酸溶液中洗涤2次,每次15~30分钟。如果聚丙烯酰胺凝胶不含SDS,可省略洗涤步骤直接进行下面的染色。
2. 凝胶浸入1X凝胶染色工作液,2-3 min即显示紫褐色蛋白条带,10~20 min可达到最大染色。
3. 取出凝胶,放入50%甲醇(或乙醇)-2%醋酸溶液脱色10分钟,直到完全洗去背景染色。
说明:
1. 如果是干燥的PVDF膜,染色前应该先用甲醇或乙醇浸泡湿润,然后用水冲洗。
2. 膜染色可在蛋白转移之后立即进行,或在完成Western Blot后进行。
3. 正如可用DNA或RNA琼脂糖凝胶电泳条带照相判断Southern或Northern Blot加样量一样,膜染色条带极其清晰并与条带蛋白含量成正比,因而可用做Western Blot的内对照。
4. 膜染色或凝胶染色之后,染色液可以回收,装入新容器内,室温或4 ºC保存,可反复使用2-4次。
蛋白研究:蛋白提取、蛋白定量、Western Blot…核酸研究:核酸提取、PCR、核酸电泳… 抗体:单克隆抗体、多克隆抗体、酶标抗体… 细胞生物学:转染试剂、生化测定、细胞培养…
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