RIPA裂解液(带PMSF) C1055
货号 |
产品名称 |
规格 |
价格 |
C1055 |
RIPA裂解液(带PMSF) |
100ml |
260元 |
描述:RIPA裂解液对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分有较强裂解作用,是常用的细胞组织快速裂解液。使用RIPA 裂解液加强型特别适于western blot和大多数蛋白-蛋白相互作用的实验等。PMSF能抑制蛋白酶对蛋白的降解。
规格:100ml
储存:RIPA裂解液 4℃保存 PMSF粉末 (100mM) -20℃保存
PMSF溶液l -20℃保存 以上组分12个月有效
操作步骤:
制备细胞裂解产物(预先将PMSF溶剂加入PMSF粉末中混匀,按1:99比例加入RIPA裂解液中)
1. 800g 4℃离心5分钟收集培养细胞,估计细胞离心后的体积(PCV, 106 cells=~20 ml, 107 cells =~100 ml PCV);
2. 每50-100 ml PCV加入5倍体积RIPA裂解缓冲液(250-500 ml),冰浴中放置10分钟,并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒;
3. 12000g 4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得细胞总蛋白产物;
4. 假如所得蛋白产物较为粘稠,95℃加热5分钟,然后迅速冰浴5分钟,12000g 4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得细胞总蛋白产物。
制备组织裂解产物(预先将PMSF溶剂加入PMSF粉末中混匀,按1:99比例加入RIPA裂解液中)
1. 取50-100 mg组织在冰上剪成碎片,用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS;
2. 加入 0.5-1 ml 预冷 RIPA 裂解缓冲液;
3. 4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40次,直到95%的细胞被破碎,然后在冰浴中放置10分钟,并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒;
4. 12000g 4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得组织总蛋白产物;
5. 假如所得蛋白产物较为粘稠,95℃加热5分钟,然后迅速冰浴5分钟,12000g 4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得组织总蛋白产物;
6. 20%的甘油保存于 -70oC 或-20oC。
注意:
1. 在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物;
2. 在做免疫沉淀或免疫共沉淀时最好在实验前进行蛋白的提取,以避免某些不稳定蛋白的降解;
3. PMSF溶液易降解,请于-20oC保存,按比例现用现加。
蛋白研究:蛋白提取、蛋白定量、Western Blot…核酸研究:核酸提取、PCR、核酸电泳… 抗体:单克隆抗体、多克隆抗体、酶标抗体… 细胞生物学:转染试剂、生化测定、细胞培养…
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