RNA Trip LS (液体样品总RNA提取试剂) R1020
货号 |
产品名称 |
规格 |
价格 |
R1020 |
RNA Trip LS (液体样品总RNA提取试剂) |
100ml |
650元 |
描述:RNA Trip LS (液体样品总RNA提取试剂)特别加强了对液体标本如全血、悬浮细胞、病毒样品等RNA的提取能力。用RNAtrip LS试剂提取液体标本RNA时,无需事先分离其中的细胞、细菌、病毒等病原微生物,直接将液体标本与RNAtrip LS试剂混合即可,极大简化了样品的提取前处理过程。并且其提取能力强大,甚至可以从已经凝固的血液块中提取出高纯度的RNA。使用方法与RNAtrip 和TRIzol相似,可在30-60分钟内完成。获得的高纯度总RNA可用于RT-PCR、Northern Blot、RNA酶保护、Poly(A) mRNA纯化、体外翻译等实验。
规格:100ml
储存: 4 ℃密封避光保存一年以上有效
操作步骤:
1. 组织细胞破碎与裂解
冰上操作。立即并快速破碎组织至关重要。组织细胞过量不仅使RNA得率下降,还将导致DNA和蛋白质污染。在紧急情况下,如动物已处死,组织已取出,细胞已收取,异地取送标本,用户尚未做好实验准备时,推荐用户把组织细胞储存在RNA保护液(Cat# R1020)中,保证标本中的RNA不会降解。
(1) 液体标本:全血、体液、尿液,悬浮细胞、病毒微生物样品等。每200ml液体样品加1 ml RNAtrip LS,置冰上。未抗凝的凝固血液按固体组织处理。
(2) 培养细胞。贴壁细胞:弃培养基,用PBS缓冲液冲洗细胞一次。每5-10´106个细胞加1 ml RNAtrip LS试剂,但加入量必须有效地覆盖瓶皿的细胞表面。一个75 cm2瓶皿的细胞通常需要 2 ml提取液,一个35 cm2瓶皿的细胞需要 1 ml提取液,更小的培养瓶皿可使用更少的提取液,但后续操作会因体积过小而极为不便。晃动瓶皿或用吸头吹打使提取液流过并裂解所有细胞。置冰上1-5分钟,倾斜瓶皿使粘稠的裂解物聚于一处以便取出。悬浮细胞:低速离心收集细胞,将细胞快速重悬于50-100ml的PBS或去离子水中,每5-10´106细胞加1 ml RNAtrip LS裂解。注意直接裂解未重悬的细胞沉淀,裂解物将十分粘稠而难以分散。细菌酵母:离心收集沉淀,加入50-100ml去离子水重悬细胞。每107细胞加入1-2 ml RNAtrip LS直接裂解。某些细菌和酵母细胞可能需要匀浆破碎。
(3) 动物组织。按比例每50-100 mg组织加1 ml RNAtrip LS试剂。用研钵研磨:仅适用于液氮冻存组织。组织放在研钵中研成粉末,加1 ml RNAtrip LS试剂,继续研磨至组织完全裂解。用玻璃匀浆器匀浆:加入RNAtrip LS上下手动匀浆组织10-15次。用高速机械匀浆器:将组织放入塑料试管内,试管置冰浴烧杯中,加入RNAtrip LS试剂,将分散器头垂直插入管内与组织块接触,转速12,000-20,000 rpm,上下移动试管10-20次,直到组织完全打散,无肉眼可见大块。有些结缔组织难以完全打碎,可以继续下一步操作。用超声仪:需根据机器型号进行预试验,选取能有效破碎组织的功率和时间。
2. 将组织细胞裂解物转移到1.5 ml离心管,置冰上10分钟。如需暂停操作,裂解物可冻存于-70 oC至少一个月。
3. 加入0.2体积的氯仿(0.2ml),充分颠倒混匀,冰上孵育1-5 分钟,溶液开始分相。有时分相不明显,不影响提取。
离心12,000g 4 oC 10 分钟,溶液分为两相。RNA保留于上层无色透明水相约0.6ml,下层为有机相,两相界面是一层薄膜其厚度与组织细胞类型和多少有关。小心吸出上层水相转移到新离心管,但应留0.5-1 mm厚水相,以免扰动和吸入下面的碎片和无机相。如吸入无机相和碎片,应将所取水相放回管中并重新离心10分钟,再吸取水相。这一点至关重要,违背此原则容易导致RNA降解和DNA污染。
4. 加入等体积异丙醇(0.5ml)于含有上清的新离心管中,充分混匀。冰上孵育10 分钟绰绰有余。但-20 oC 放置一至数小时,可回收几乎所有的RNA。如需尽可能多的RNA,或起始组织细胞的量很少,或用户需要暂停操作时,可以这样做。用更低的温度和更长的时间进行沉淀并不必要。
5. 离心, 12,000g,4 oC,10分钟。小心弃上清,管底可见少许黄白色RNA沉淀。如初始组织细胞量少,RNA沉淀用肉眼几乎难辨,但不影响实验。
6. 洗涤沉淀。立即加入1 ml 75%乙醇,颠倒混匀数次,12,000g 5分钟。弃上清,尽量吸去管壁上的液体。乙醇洗涤后RNA沉淀容易漂浮,勿倒掉RNA沉淀。此时可将RNA沉淀保存在75%乙醇中,4 oC一周或-20 oC一年。
7. 敞开管口空气干燥5-10分钟,RNA沉淀干燥至胶冻状即可。过分干燥将使RNA难以溶解。用50-100 ml DEPC处理的高压消毒纯水或TE溶解沉淀。如RNA难溶,可55 oC加热10分钟,或反复冻融数次助溶。RNA溶液可保存于-70 oC或液氮中;或加3倍体积乙醇-20 oC冻存,用时离心沉淀。
测定OD值。计算RNA浓度和OD260/280比值。RNAtrip LS提取的RNA绝少蛋白污染,比值通常在1.6-2.0之间均属正常。OD260/280比值受很多因素影响。起始组织量过大或RNAtrip LS试剂过少,或吸取了有机相或碎片,将使OD260/280比值降低,应预以避免;RNA用水溶解或pH偏酸OD260/280偏低,而用TE或离子强度较高的溶液溶解时该比值较高,但均不影响RNA使用。用户应该知道,即便是已降解的RNA,该比值也能达到看似完美的2.0左右,因此该比值并非判断RNA降解与否的指标。可进行RNA琼脂糖电泳检查RNA完整性(见说明2)。
蛋白研究:蛋白提取、蛋白定量、Western Blot…核酸研究:核酸提取、PCR、核酸电泳… 抗体:单克隆抗体、多克隆抗体、酶标抗体… 细胞生物学:转染试剂、生化测定、细胞培养…
联系方式
通信地址:北京市昌平区振兴路36号2号楼3层330
客服电话:010-60781808 010-62027915
公司邮箱:sale@applygen.com
邮政编码:102299
版权所有 北京普利莱基因技术有限公司 Applygen Technologies Inc.
京ICP备05011537号-1