TRIzol (总RNA提取试剂) R1030
货号 |
产品名称 |
规格 |
价格 |
R1030 |
TRIzol (总RNA提取试剂) |
100ml |
560元 |
描述:TRIzol是一种快速从组织细胞中提取总RNA的单相试剂。在样品裂解过程中TRIzol能够抑制RNA酶活性保持RNA完整性;加入氯仿后离心,RNA相将与DNA和蛋白质分离,随后用异丙醇沉淀RNA。如果需要还可以继续提取DNA和蛋白质。纯化的总RNA可用于RT-PCR、Northern Blot、RNA酶保护、Poly(A) mRNA纯化、体外翻译等实验。
规格:100ml
储存:4 ℃密封避光保存两年有效
简要操作步骤:
1. 组织细胞破碎与裂解
2. 将组织细胞裂解物转移到1.5 mL 离心管,置冰上10分钟。
3. 加入0.2 体积的氯仿( 0.2mL ),充分颠倒混匀,冰上孵育1-5 分钟,溶液开始分相。有时分相不明显,不影响提取。
4. 离心12,000 g 4 ℃ 10分钟,溶液分为两相。RNA在上层水相,下层为有机相,两相界面是一层薄膜其厚度与组织细胞类型和多少有关。小心吸出0.5 mL上层水相转移到新离心管。
5. 加入等体积异丙醇( 0.5mL )于上清液充分混匀。冰上孵育10 分钟沉淀RNA。用更低的温度和更长的时间进行沉淀并不必要。如果起始组织细胞的量很少,-20 ℃放置一至数小时可沉淀几乎所有的RNA。
6. 12,000 g,4 ℃ 离心10分钟。管底可见少许RNA沉淀。
7. 弃上清。立即加入1 mL 75% 乙醇,颠倒混匀数次洗涤沉淀。12,000 g离心5分钟。弃上清,尽量完全吸去管壁上的液体。
8. 敞开管口,空气干燥5-10分钟使残留液体挥发,RNA略微沉淀干燥即可。用50-100 mL自备的DEPC处理的高压消毒纯水或TE溶解沉淀。RNA溶液可保存于-70摄氏度或液氮中。
说明:
1. 每100 mg组织RNA预期得率为:肝脾60-100 mg, 肾50 mg, 脑组织10-15 mg, 胎盘20-40 mg, 脂肪50 mg。1 x 107个细胞通常得50-100 mg。
2. 测定OD值,根据OD260计算RNA浓度。OD260/280比值可初步判断RNA质量,比值在1.6-2.0之间均属正常。起始组织量过大,或吸取了有机相或碎片,将使RNA样品中蛋白和杂质含量高,RNA沉淀乙醇洗涤不充分(步骤8),均可导致OD260/280比值降低。例如,RNA用水溶解或pH偏酸OD260/280偏低,用TE或离子强度较高的溶液溶解时较高,但均不影响RNA后续使用。切记即便是已降解的RNA,OD260/280比值也能达到看似完美的2.0左右,因此该比值并非判断RNA降解与否最佳的指标。判断RNA质量的最佳途径是进行普通RNA琼脂糖电泳检查RNA完整性。
3. 检查RNA完整性。取1 mg RNA样品进行1%普通琼脂糖凝胶电泳。溴化乙锭染色,紫外灯观察。28S RNA~5 kb亮度应该约为18S RNA~2 kb的两倍,有时可见0.1-0.3 kb 的5S RNA。
4. 调整RNA溶液的体积或重沉淀RNA。(1) 加入适量DEPC处理过的高压消毒纯水或TE缓冲液,于RNA溶液中,使溶液体积补齐到约400 ml;(2) 加入 0.1 体积的3M 醋酸钠 pH 5.2,混匀;(3) 加入2.5体积的纯乙醇,混匀;(4) 冰上孵育10 分钟;(5) 12,000g 4 oC 离心10 分钟,弃上清;(6) 执行上述RNA提取程序的步骤6-8。
5. Trizol勿直接接触皮肤和吸入。如接触皮肤,立即用大量水清洗。
蛋白研究:蛋白提取、蛋白定量、Western Blot…核酸研究:核酸提取、PCR、核酸电泳… 抗体:单克隆抗体、多克隆抗体、酶标抗体… 细胞生物学:转染试剂、生化测定、细胞培养…
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