液体样本总胆固醇(TC)酶法测定试剂盒 E1005
货号 | 产品名称 | 规格 | 价格(元) |
E1005-125 | 液体样本总胆固醇(TC)酶法测定试剂盒 | 125次 | 640 |
E1005-250 | 液体样本总胆固醇(TC)酶法测定试剂盒 | 250次 | 920 |
描述:血浆总胆固醇包括2/3的胆固醇酯和1/3的游离胆固醇,是血脂的重要组分,二者与心脑血管疾病以及多种病理状态密切相关。本试剂盒采用世界卫生组织(WHO)、美国FDA、中国《全国临床检验操作规程》推荐的总胆固醇和游离胆固醇检测方法,灵敏度高,检测范围20~5000 µmol/L。可靠性和重复性俱佳。
原理:本试剂盒测定方法采用CHOD-PAP终点方法结合经典GPO Trinder酶学反应【1】【2】,其原理为:(1) 胆固醇酯酶分解胆固醇酯为游离胆固醇。(2) 胆固醇氧化酶将游离胆固醇氧化,产生过氧化氢。(3) 在过氧化物酶催化下生色底物转化为苯醌亚胺,光密度值与胆固醇浓度成正比。
参考文献
1. Trinder, P. (1969). Annals of Clin. Biochem. 6: 24 – 27
2. Barham D and Trinder P. (1972). Analyst 97: 142 – 145
测定样品范围: 血清、培养基
组成:(1) R1试剂 40 ml (2) R2试剂 10 ml (3) 5 mmol/L胆固醇标准品 0.5 ml
储存条件:4ºC,三个月
所需设备:721、722型可见光分光光度计、酶标仪、生化分析仪。最佳工作波长550-555nm,如仪器无此波长建议优先选用570 nm,次选530、490nm。常规比色杯即可。
操作步骤:
一、工作溶液配制: 按4:1比例,取4 ml R1试剂与1 ml R2试剂混合均匀,立即使用或4ºC保存<1天,变色弃去。
二、样本处理:
培养基:取无酚红无血清细胞培养液,4ºC,10,000g离心5 min,取上清测定。新鲜培养基4ºC存放不宜超过1小时,若暂时无法测定可70ºC加热10 min后冻存,测定前离心。
血液:新鲜血液4ºC, 2000 g离心5 min得到血浆,非抗凝血4ºC放置2小时得到血清。可4ºC 存放数天或−20 ºC半年。如超过线性范围用生理盐水1:1~1:5稀释后测定。
三、标准品稀释:
5 mM胆固醇标准品用无水乙醇倍比稀释为2500、1250、625、312.5、156、78、39 µmol/L。通常稀释4个点/管即可,注意设置0浓度对照反应管。立即使用。
四、总胆固醇测定:
1. 取190 µl工作液。
2. 在各工作液中,分别加入10 µl (5~10µl) 空白对照溶液(无水乙醇或蒸馏水均可)、标准品、待测样品,反应总体积200 µl。
3. 37ºC反应20min (15~30min)。也可25ºC室温反应30 min但灵敏度会略微下降。反应平衡后颜色在60 min内稳定。
4. 测定时,先用蒸馏水(或无水乙醇)+工作液空白对照管调零,然后测定各管OD值。
5. 绘制标准曲线并计算总胆固醇浓度。
Excel绘制标准曲线步骤:各标准管OD值为y轴,标准品浓度为x轴。(1)鼠标左键圈住数据,点击做图向导,选择-散点图-,点击-完成-。(2)鼠标右键点图上的某一点,点击-添加趋势线-,点击-选项-,点击-显示公式-和-R2值-。
游离胆固醇测定:请参见液体游离胆固(血液、培养基)酶法测定试剂盒货号E1006、组织细胞游离胆固醇酶法测定试剂盒货号E1016说明书。
胆固醇酯测定:在测定胆固醇酯含量时,需要同时采用E1005和E1006两种试剂盒,分别测定总胆固醇和游离胆固醇,二者的差值即为胆固醇酯的含量。适于血液和某些细胞内胆固醇酯测定。
胆固醇酯在肝脏生成。血胆固醇酯降低和胆固醇酯/总胆固醇酯比值降低见于慢性肝病。胆道阻塞时,血胆固醇酯与总胆固醇浓度均升高但其比值正常。故有助于肝实质损害与单纯胆道阻塞的鉴别诊断。
需要注意的是:这种由差值计算求得的胆固醇酯的值,主要适合血液样品测定,可能不很适合培养基、细胞内胆固醇酯测定。其原因主要与细胞内胆固醇酯和游离胆固醇的合成、转运、外流、储存、分解、再酯化等诸多动态生物过程的非线性的高度复杂性有关,还与现有测量方法的局限性有关。另外,胆固醇(酯)的含量以及代谢方式在不同类型的细胞内如肝细胞、巨噬细胞、肌肉细胞、成纤维细胞等存在巨大差异。有时以差值计算的胆固醇酯出现背离和偏差,甚至为负值。如果出现这种情况,建议在数据分析时采用胆固醇酯/总胆固醇比值,而非胆固醇酯绝对值;或者尝试用同位素标记方法、薄层层析、HPLC等方法测定胆固醇酯,或许会有改善。
说明:
1. 可微量调整样品与工作液体积比例。
2. 正常人血中总胆固醇参考值2.86~5.98mmol/L或 110~230mg/dl。
3. 维生素C>0.18g/L、血红蛋白>2g/L、胆红素>0.25g/L、强还原剂二硫苏糖醇、巯基乙醇等干扰测试。
以下仅仅列举部分使用普利莱总胆固醇测定试剂盒发表的SCI文章,供参考。
1、 Tong L T, Zhong K, Liu L, et al. Effects of dietary hull-less barley β-glucan on the cholesterol metabolism of hypercholesterolemic hamsters[J]. Food chemistry, 2015, 169: 344-349.
2、 Tong L T, Zhong K, Liu L, et al. Effects of dietary wheat bran arabinoxylans on cholesterol metabolism of hypercholesterolemic hamsters[J]. Carbohydrate polymers, 2014, 112: 1-5.
3、 Hu X, Wang T, Li W, et al. Effects of NS lactobacillus strains on lipid metabolism of rats fed a high-cholesterol diet[J]. Lipids Health Dis, 2013, 12(67): 10.1186.
4、 Tong L T, Zhong K, Liu L, et al. Oat oil lowers the plasma and liver cholesterol concentrations by promoting the excretion of faecal lipids in hypercholesterolemic rats[J]. Food chemistry, 2014, 142: 129-134.
5、 Cui M, Xiao Z L, Sun B D, et al. Involvement of cholesterol in hepatitis B virus X protein-induced abnormal lipid metabolism of hepatoma cells via up-regulating miR-205-targeted ACSL4[J]. Biochemical and biophysical research communications, 2014, 445(3): 651-655.
6、 Li S, Li Y, Ning H, et al. Calcium supplementation increases circulating cholesterol by reducing its catabolism via GPER and TRPC1-dependent pathway in estrogen deficient women[J]. International journal of cardiology, 2013, 168(3): 2548-2560.
7、 Cai D, Jia Y, Lu J, et al. Maternal dietary betaine supplementation modifies hepatic expression of cholesterol metabolic genes via epigenetic mechanisms in newborn piglets[J]. British Journal of Nutrition, 2014, 112(09): 1459-1468.
8、 Li H, Li H, Guo H, et al. Cholesterol suppresses adipocytic differentiation of mouse adipose-derived stromal cells via PPARγ2 signaling[J]. Steroids, 2013, 78(5): 454-461.
9、 Li H, Guo H, Li H. Cholesterol loading affects osteoblastic differentiation in mouse mesenchymal stem cells[J]. Steroids, 2013, 78(4): 426-433.
10、Wu D M, He Z, Ma L P, et al. Increased DNA methylation of scavenger receptor class B type I contributes to inhibitory effects of prenatal caffeine ingestion on cholesterol uptake and steroidogenesis in fetal adrenals[J]. Toxicology and applied pharmacology, 2015, 285(2): 89-97.
11、 Liu Z W, Li X B, Li X W. Effects of Propylthiouracil-Induced Hypothyroidism on Nonalcoholic Fatty Liver Disease in Rats Fed a High-Fat and High-Cholesterol Diet[J]. 2014.
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