液体样本总超氧化物歧化酶SOD活性检测试剂盒(WST-8法) E2010
货号 | 产品名称 | 规格 | 价格(元) |
E2010-50 | 液体样本总超氧化物歧化酶SOD活性检测试剂盒(WST-8法) | 50次 | 280 |
E2010-100 | 液体样本总超氧化物歧化酶SOD活性检测试剂盒(WST-8法) | 100次 | 540 |
描述:超氧化物岐化酶(Superoxide Dismutase, SOD) 能催化超氧化物阴离子发生岐化作用,生成过氧化氢和氧气,是生物体内一种重要的抗氧化酶。在生物抗氧化机制中扮演重要角色。目前测定SOD活性常用方法有WST-1法和WST-8法,其中WST-8法比WST-1法更加稳定、灵敏度更高。本试剂盒采用了目前测定SOD方法中稳定性更好、灵敏度更高的的WST-8法。可以检测细胞或组织匀浆液上清、血浆、红细胞抽提物、血清等生物样品中的SOD活性。一个试剂盒共可以进行100次检测。
原理:WST-8可以和黄嘌呤氧化酶催化产生的超氧化物阴离子反应产生水溶性的甲臜染料(formazan dye),该反应步骤可以被SOD所抑制。通过对WST-8产物的比色分析即可计算SOD酶活力。
适用范围:血清、血浆、红细胞抽提物等液体样本
组成:(100次,50次减半)
1. SOD检测缓冲液: 70 ml
2. WST-8: 800 ul
3. 酶溶液: 100ul
4. 反应启动液(40X): 60ul
储存:-20℃避光保存,6个月有效。
操作步骤:
1. 样品准备: (以血浆样本为例)
血浆样品的准备:用抗凝管(肝素钠或EDTA)收集血液,颠倒混匀。4 ℃ 600g 离心10分钟,移取上清至另一新的1ml 离心管中,适量生理盐水稀释后即可作为血浆样本进行检测。
2. 试剂盒准备:
a. WST-8酶工作液的配制: 参照下表,根据待检测样品(包括标准品) 数量,配制适量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。
注意:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。
b. 反应启动工作液配制:将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀,按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释,即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。
c. (可选做) SOD 标准品准备:需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升,参考样品进行检测。说明:为避免稀释后SOD酶活性的下降, SOD标准品宜现稀释现使用;本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品,但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。
3. 样品测定:
a. 参考下表使用96孔板加入各个组分,注意设置样品孔和各种空白对照孔。
注意:加入反应启动工作液后反应即会开始,可以在低温操作或用排枪操作以减小各孔间因加入反应启动工作液的时间先后差异而导致的误差。
b. 37℃孵育30分钟。
说明:孵育25至35分钟检测出来的SOD活力无显著差异,但为保证检测结果的一致性,推荐孵育30分钟。
c. 450nm 测定吸光度。如无450nm 滤光片,可以使用420-480nm 的滤光片。也可以使用大于600nm 的波长作为参考波长进行双波长测定。
4. 样品中总SOD活力的计算:
a. 抑制百分率的计算:
参考如下计算公式计算抑制百分率:
抑制百分率=[(A空白对照1-A空白对照2)-(A样品-A空白对照3)] / (A空白对照1-A空白对照2) × 100%
如果没有设置空白对照3,则可以把计算公式简化为:
抑制百分率=(A空白对照1-A样品) / (A空白对照1-A空白对照2) × 100%
如果计算出来的抑制百分率小于30% 或大于70% ,则通常需要把该样品重新测定。尽量使样品的抑制百分率在30-70%范围内。如果测定出来的抑制百分率偏高,则需适当稀释样品;如果测定出来的抑制百分率偏低,则需重新准备浓度较高的待测样品。
b. SOD酶活力单位的定义:在上述黄嘌呤氧化酶藕联反应体系中抑制百分率为50% 时,反应体系中的SOD酶活力定义为一个酶活力单位 (unit)。注意:SOD的活力单位的定义方式有很多种,不同的活力单位需根据其定义的不同进行适当换算。
c. SOD酶活力的计算:
SOD酶活力的计算公式如下:
待测样品中SOD酶活力单位=检测体系中SOD酶活力单位=抑制百分率/ (1-抑制百分率) units
例如,当抑制百分率为50% 时,待测样品中SOD酶活力单位=50% / (1-50%)units=1 unit;当抑制百分率为60% 时,待测样品中SOD酶活力单位=60% / (1-60%)units=1.5 units。
蛋白研究:蛋白提取、蛋白定量、Western Blot…核酸研究:核酸提取、PCR、核酸电泳… 抗体:单克隆抗体、多克隆抗体、酶标抗体… 细胞生物学:转染试剂、生化测定、细胞培养…
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