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C1310	MTT细胞增殖-毒性检测试剂盒	500次	320元

 

描述：MTT四唑蓝是一种能接受氢原子的染料，在细胞培养基中可被活细胞的线粒体琥珀酸脱氢酶还原为水不溶性的深紫色结晶状产物Formazan，但死亡细胞不能进行此还原反应。用特定溶剂溶解MTT所产生的水不溶性紫色结晶，然后用酶标仪在570 nm波长附近(500~600 nm)测定光吸收值，可反映活细胞的数量和代谢活力，并由此反映出细胞的存活、增殖、生长和毒性等状态。例如，加入细胞生长因子后，增殖生长旺盛的细胞将还原更多的MTT，并具有较高的光吸收度；反之，抗增殖抗肿瘤或细胞毒药物处理后，细胞生长变慢或毒性变大，光吸收度下降。该方法也可用于检测非药物刺激，如物理因素对细胞增殖和活力的影响。与3H-胸腺嘧啶掺入方法相比，简便快速可靠，不使用放射性同位素，广泛用于检测细胞存活、增殖、生长、毒性实验。

规格：500次

储存：MTT Stock  −20ºC保存 12个月有效   

MTT溶解剂  室温保存 12个月有效

操作步骤：

1. 使用与酶标仪匹配的96孔培养板。测定细胞增殖时，建议每孔加100微升(约含2000个细胞左右)，测定细胞毒性每孔加100微升（约含5000个细胞左右），应根据所用的细胞类型、增殖速度进行调整。注意设置2-3个重复孔，分别为接受处理细胞，未处理细胞对照、无细胞培养基对照。37 ºC培养细胞24-48小时，然后给予特定的药物或物理因素刺激。
2. 处理结束后，每孔每100 µl培养基加入10µl MTT Stock，37 ºC培养箱内继续孵育4小时。也可更换100 µl新鲜无血清培养基后再加MTT Stock。 样品数多时，可将MTT Stock与培养基预先混合后加入。
3. 溶解：

(a) 如果细胞贴壁良好，可吸除培养基，然后每孔加入100µl MTT 溶解剂，此时应注意保持各孔内液体容积一致。37 ºC培养箱内继续孵育4小时。

(b) 如果细胞贴壁不佳吸除培养基会导致MTT生成的结晶丢失，在这种情况下，可直接在孔内加入100µl MTT溶解剂，注意此时测试孔和对照孔内原有的液体体积应保持一致。37 ºC培养箱内继续孵育4小时至紫色结晶状formazan沉积物全部溶解，可用显微镜进行观察。这一步骤通常需要2~4 h，但随细胞类型、数量、活力的不同而变化。如未完全溶解应延长孵育时间。当用显微镜观察时，一旦结晶溶解完毕应尽快测定OD吸光度值。

4. 在570nm测定OD吸光度并进行比较计算。如无570nm滤光片可用500-600nm范围内的滤光片。注意：为准确考虑可在699 nm处测定未还原的MTT本身的吸光度OD值， 然后用OD₅₇₀减去OD₆₉₉。这在进行3(b)操作时尤为必要。
5. 结果判断：细胞增殖或毒性＝100％ x (OD_实验－OD_本底) / (OD_对照－OD_本底)。

     OD_实验是接受处理细胞的OD值，OD_对照是未处理细胞对照管OD值，OD_本底是无细胞培养基对照OD值。处理后细胞增殖或毒性变化表示为未处理对照的百分数。

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