OligoHifectin寡聚核苷酸真核细胞转染试剂 C1515
货号 | 产品名称 | 规格 | 价格 |
C1515 | OligoHifectin寡聚核苷酸真核细胞转染试剂 | 0.25ml | 750元 |
C1515 | OligoHifectin寡聚核苷酸真核细胞转染试剂 | 0.5ml | 1300元 |
C1515 | OligoHifectin寡聚核苷酸真核细胞转染试剂 | 1ml | 2100元 |
描述:对于质粒DNA转染来说,通常是小分子脂质体包裹大分子DNA,形成的复合物表面有一层带正电荷的磷脂层,能以有效进入细胞。但是,由于短链DNA、反义寡聚核苷酸、或小RNA片断通常明显小于普通的脂质体颗粒,因而难以被脂质体有效包裹,相反甚至是小DNA或小RNA结合在脂质体表面,因而难以被有效转染。
HifectinIII是一种特殊的阳离子脂质体,专用于短的双链DNA片断、单链(反义)寡聚核苷酸、siRNA片段的真核细胞转染。这种特殊的脂质体经过特别程序制备处理后,能非常有效地包裹小DNA或小RNA颗粒,形成带正电荷表层的稳定复合物,进而高效转染进入真核细胞。其转染高效、细胞谱广、低毒、可靠。
适用:短双链DNA片断、寡聚核苷酸单链、siRNA片段转染,适用多种传代或原代细胞。
规格:0.25 ml 转染10个24孔板,0.5 ml 转染20个24孔板,1 ml 转染40个24孔板
储存:4ºC储存12个月。切勿冻存。
细胞准备:
转染前一天传0.5-2 ´ 105细胞于24孔板内,加1 ml正常培养基培养。在光镜下观察细胞,当细胞群覆盖培养瓶皿生长表面的 85-95%时,为HifectinIII转染的最佳时机。这通常需要18-24小时,但依细胞类型和量而变。传代数过多的细胞,或100%长满的细胞转化效率明显降低。
小DNA溶液准备:转染前取出小DNA或小RNA储存液,用灭菌生理盐水或无血清无抗生素培养基,稀释到终浓度为0.1 µg/ml。切记,此处较低的稀释浓度是必要的,将保证后续步骤的转染混合物具有适宜的体积以及比例,对转染试剂进行必要且适宜的稀释,进而保证形成有效的转染混合物。建议不可随意改变推荐的终浓度。
制备转染复合物:
按照1:10的体积比例,取4µl Hifectin III,加入到40µl 小DNA溶液(浓度0.1 µg/µl)中,注意加样顺序不要反过来将DNA加到转染试剂中。混合均匀,置旋涡振荡器剧烈振荡。室温放置15分钟。然后将44µl转染复合物加入到956µl无血清培养基,总体积1 ml,将用于细胞转染。
表1列出每孔细胞数和所需转染液的体积,据此计算需要配制的转染液的总量。考虑到移液损失,实际上要多配制一些,例如一个24孔板可按照26~28孔的量来配制。
表2列出具体的加样量,初始加样量参考表2的黑体栏,随后可根据细胞毒性和转染效率,加量减量进行优化。最终与细胞接触的HifectinIII不应超过8 µl/ml,小DNA浓度应小于6 µg/ml,否则将导致细胞毒降低转染效率。
表1 培养皿、细胞数和转染终体积
培养皿 |
面积 cm2 |
细胞数 |
转染终体积 |
96-well |
0.3 |
1 ´ 104 |
0.1 ml |
48-well |
1 |
5 ´ 104 |
0.2 ml |
24-well |
2 |
1 ´ 105 |
0.5 ml |
12-well |
4 |
2 ´ 105 |
1 ml |
6-well |
10 |
5 ´ 105 |
2 ml |
35-mm |
10 |
5 ´ 105 |
2 ml |
60-mm |
30 |
1 ´ 106 |
5 ml |
10-cm |
75 |
4 ´ 106 |
10 ml |
表2 转染试剂与DNA的加样量
|
Step 1 |
Step 2 |
Step 3 |
Step 4 |
Step 5 |
Hifectin III |
小DNA |
混合物 |
培养基(µl) |
终体积(µl) |
|
减量优化 |
3 µl |
3 µg/30 µl |
33 µl |
967 |
1000 |
建议起始量 |
4 µl |
4 µg/40 µl |
44 µl |
956 |
1000 |
加量优化 |
5 µl |
5 µg/50 µl |
55 µl |
945 |
1000 |
加最优化 |
6 µl |
6 µg/60 µl |
66 µl |
934 |
1000 |
转染细胞:
用无血清培养基洗涤细胞1-2次,洗涤后尽量吸除孔内液体。按照表1提示的量加入适宜体积的含转染试剂的无血清培养基。孵育细胞4-6小时后,吸除转染培养基,加入含血清的正常培养基继续培养24小时以上;有时或直接将含血清培养基加到孔内,继续培养24小时以上。观察细胞,进行下一步实验。
说明:
悬浮细胞转染:悬浮细胞转染与上述步骤类似:(1) 离心收取细胞,用不含血清培养基洗涤2次。每1 ´ 106 细胞可重悬于2 ml含转染试剂的无血清培养基,加入6孔板内。
蛋白研究:蛋白提取、蛋白定量、Western Blot…核酸研究:核酸提取、PCR、核酸电泳… 抗体:单克隆抗体、多克隆抗体、酶标抗体… 细胞生物学:转染试剂、生化测定、细胞培养…
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